BeaverBeadsTM Protein A（or Protein G）抗體純化磁珠系列產(chǎn)品是由 NHS 活化的超順磁性微球與Protein A（or Protein G）共價(jià)結(jié)合形成的復(fù)合微粒。
- 產(chǎn)品貨號(hào):70814-100
- 產(chǎn)品單位:瓶
- 產(chǎn)品說明:100 mL, 10%(V/V), 10-30 μm
產(chǎn)品介紹：
BeaverBeadsTM Protein A（or Protein G）抗體純化磁珠系列產(chǎn)品是由 NHS 活化的超順磁性微球與Protein A（or Protein G）共價(jià)結(jié)合形成的復(fù)合微粒。與當(dāng)前國際免疫磁珠市場上同類產(chǎn)品相比，該產(chǎn)品具有更高的抗體結(jié)合能力和較低的蛋白非特異吸附率，洗脫條件更均一，一步純化即可從血清樣品中分離出純度大于 90%的抗體。
本產(chǎn)品為微米級(jí)磁性微球，熟練操作可在 15 min 內(nèi)完成抗體吸附過程，30 min 內(nèi)完成抗體純化流程。本產(chǎn)品可重復(fù)使用，適用于血漿、腹水、組織培養(yǎng)上清液等樣品中的抗體純化，也可用于抗體固定及其它相關(guān)研究。用戶可根據(jù)目標(biāo)抗體的種屬來源及亞型選擇磁珠的類別，Magrose Protein A，Magrose Protein G 磁珠與不同抗體的親和性比較參見附表 1。
產(chǎn)品信息:
操作流程(以純化人血清 IgG 為例)：
1. 樣品處理：取人血清 100 μL 至 1.5 mL EP 管中，接著加入 900 μL 結(jié)合洗滌液，充分混勻。
2. 磁珠預(yù)處理：將抗體純化磁珠漩渦振蕩 30 s，使磁珠充分重懸；取 200 μL 10%（v/v）磁珠懸液置于另一新的 1.5 mL EP 管中。對(duì)磁珠懸液進(jìn)行磁性分離，棄上清液，用 1 mL 結(jié)合洗滌液 洗滌 2 次，磁性分離，管中磁珠可直接用于抗體分離。
注意事項(xiàng)：該步驟磁珠的用量可根據(jù)磁珠對(duì)目標(biāo)抗體的最大結(jié)合量進(jìn)行調(diào)節(jié)，當(dāng)目標(biāo)抗體的濃度大于150 μg/mL 時(shí)，用戶可取 1.2~1.5 倍磁珠用量（計(jì)算方式：如 1.5*樣品中目標(biāo)抗體含量/磁珠最大結(jié)合量），若目標(biāo)抗體濃度過低，如低于 70 μg/mL 時(shí)，客戶為了提高抗體回收率，可增加磁珠用量，如提高至 3 倍磁珠用量。
3. 抗體吸附：在步驟2 預(yù)處理的磁珠管中加入步驟1 處理的樣品溶液，漩渦振蕩均勻，在室溫下（約25℃） 置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn) EP 管，促使樣品和磁珠充分接觸并吸附，翻轉(zhuǎn)約 15 min 后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液。
4. 磁珠洗滌：向EP 管中加入 1 mL 結(jié)合洗滌液，振蕩重懸磁珠后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液； 該操作重復(fù) 3 次。
5. 抗體洗脫：在上述完成磁珠洗滌的 EP 管中加入 0.5~1.0 mL 洗脫液，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下（約 25℃）置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn) EP 管，翻轉(zhuǎn) 10 min 后進(jìn)行磁性分離，收集上清液至新的 EP 管。
注意事項(xiàng)：該步驟 洗脫液 用量，建議客戶使最終洗脫的抗體濃度控制在 0.6~1.2 mg/mL，此時(shí)第1 次洗脫條件中 95%以上的抗體將被洗脫下來；若洗脫液用量過少，會(huì)導(dǎo)致部分抗體在第 1 次洗脫時(shí)仍然留在磁珠上，從而導(dǎo)致抗體回收率降低。
6. 抗體中和：在步驟 5 抗體洗脫液中加入一定量的 中和液，一般為抗體洗脫體積的 1/10，最終使洗脫的抗體pH 值保持中性環(huán)境，以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。
7. 磁珠后處理：使用后的磁珠用 洗脫液 洗滌 2 次，磁性分離，棄上清液；接著用 結(jié)合洗滌液 洗滌 3 次，磁性分離，棄上清液，加入 200 μL 保存液 重懸磁珠，置于 2~8℃保存。
附表 1： Protein A 和 Protein G 與不同來源及類型的抗體親和性比較
